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酶基因在毕赤酵母中的诱导表达 [返回]

高活力外源β-葡萄糖苷酶及开发利用发酵液残渣酵母为目标,以基因工程菌GSI15 bgI1为菌株,研究了β~葡萄糖苷酶诱导表达的适宜条件及其酶学特性;在此基础上,进行了5L发酵罐放大发酵实验;并就如何利用发酵液中的酵母进行了探索性的研究。结果表明:
基因工程菌GS115 bgl1诱导表达β-葡萄糖苷酶的适宜条件为: FM21培养基的pH为6.0,组氨酸和PTM1的加入量分别为0.1%和0.4%,接种量为6%,每24h添加一次1%甲醇。此外,添加硫酸铵,磷酸二氢钾,Tween80,油酸可提高β-葡萄糖苷酶的酶活。发酵罐的高密度发酵结果表明,甲醇诱导72h后,β~葡萄糖苷酶活可达145 IU/mL,蛋白表达量可达7500mg/L。与摇瓶相比,最高酶活及胞外蛋白表达量分别提高了1.87倍和.79倍,是出发菌株黑曲霉产酶能力的33.6倍,实现了β-葡萄糖苷酶的高效表达。.利用浓盐法提取发酵液残渣酵母中的核酸时,核酸得率为1.56%,提取率为2.71%,纯度达97.2%,分子量在19392bp左右。利用碱法提取发酵液残渣酵母中的多糖时,可得到高附加值的B-1,3-_D-葡聚 糖和甘露聚糖两种多糖。通过对发酵液中的酵母进行综合利用,既减少了废酵母的大量排放对环境的污染,同时也为核糖核酸及多糖提供了新的来源。东莞理工学院,环境学院微生物发酵罐 

 

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