大肠杆菌是表达外源蛋白的表达系统.重组蛋白分泌表达与胞内表达相比有很大优越性,在细胞周质腔不仅能促进重组蛋白，还能促进分泌蛋白的加工。本文旨在分享反应器设计理念（Bionet engineer生物反应器F1-5MC）在大肠杆菌中表达可溶性外源蛋白的应用,目的是为了优化外源蛋白的生物活性。

关键词：大肠杆菌 、重组蛋白、分泌表达，生物反应器，搅拌系统

大肠杆菌具有遗传背景清楚、繁殖快、成本低、表达量高表达产物容易纯化等优点,是基因表达技术中发展和目前应用泛的多是经典表达系统。蛋白分泌表达是指重组异源蛋白通过运输或分泌方式定位于细胞周质,甚至穿过外膜进入培养基中。重组蛋白分泌表达的优势在于胞周质或胞外分泌表达过程中,肽在细胞内剪切，更有可能产生目的蛋白,大肠杆菌的胞周质中含有一系列的酶，并提供了一个氧化环境,有利于活性蛋白质的产量得到提高。蛋白分泌性表达,减少了对宿主菌的毒性和代谢负担,使宿主菌适应性增加;也有利于后期目的蛋白的纯化（Bionet TFF 纯化系统）。

主要实验室设备生物反应器F1-5M（Bionet Engineering）,超净工作台、生物安全柜，灭菌锅。

Bionet engineer设计理念对培养优化影响(F1-5LMC为例)

培养基成分、培养条件及培养过程中有效抑制性或促进代谢产物的积累等都会影响重组蛋白在工程菌中的表达产量和分泌的量。其中培养基营养成分、pH和温度，气体，搅拌速度等参数是影响工程菌生长和表达外源蛋白的重要因素,能够影响蛋白酶的活性、分泌和表达水平。30 °C±0.5℃和37 °C±0.5℃两种温度条件下，其他参数也做响应调整条件下培养表达,所得菌湿重分别为6. 962 g±0.01/L和4. 253 g±0.02/L,目标蛋白表达率分别接近29.6%和23.5%,因此确定30 °C±0.5℃为表达峰值合适温度。OD在线浓度分析测试数据与总体称重数据再次佐证的Bionet engineer设计理念下的搅拌系统对大肠杆菌的生长变化增长倍数是三角瓶培养的10倍，是其他品牌生物反应器扩增的1.2倍左右。

总结：Bionet engineer设计理念的生物反应器能够完全胜任大肠杆菌的优化，能够捕获细微实时数据，给客户提供所需要产品的峰值有效数据。

本资料最终解释归-斯沃德（北京）仪器设备有限公司